在細(xì)菌學(xué)診斷工作中,常需要從被檢材料中分離細(xì)菌,并獲得純培養(yǎng)。因此,通常要用到蜀科高速冷凍離心機(jī)對樣品進(jìn)行離心分離,細(xì)菌的離心機(jī)分離培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)菌學(xué)診斷中的一項(xiàng)重要基本操作。
分離細(xì)菌的方法很多,常用的有以下幾種:
將被檢材料接種于適宜培養(yǎng)基,再于固體培養(yǎng)基表面生長的菌落中,選樣欲分離菌的單個菌落,移種于另一適宜培養(yǎng)基中培養(yǎng)。因?yàn)橐粋€菌落通常由一個細(xì)菌生長繁殖所形成,故培養(yǎng)出的細(xì)菌是單一的種類,即純培養(yǎng)。
或者用特殊的培養(yǎng)環(huán)境(如厭氧、二氧化碳環(huán)境等)分離細(xì)菌。將被檢材料接種于易感動物體內(nèi),使病原菌在動物體內(nèi)繁殖,然后從動物體內(nèi)取材料利用蜀科高速冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心分離出需要的成分后培養(yǎng)。利用某些細(xì)菌對一些理化因素有特殊抵抗力,用理化方法處理接種材料,殺死其他微生物而保存需要的細(xì)菌,再分離培養(yǎng)。
一般情況下,被檢材料用前種方法分離培養(yǎng)即可。如材料污染嚴(yán)重,可先用后種方法處理,再用前種方法獲得純培養(yǎng)。
在分離培養(yǎng)操作中,嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。所有用具、培養(yǎng)基、試劑都要經(jīng)過滅菌,而且不能長時(shí)間暴露于空氣中。禁止用手接觸或用口吹已滅菌的器皿內(nèi)部。
根據(jù)被檢材料中可能存在的病原苗的特性,選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基和培養(yǎng)條件:(溫度、氣體環(huán)境等)。進(jìn)行未知菌的初次分離,好多用幾種培養(yǎng)基,如肉湯、鮮血瓊脂、麥康克瓊脂等,每種培養(yǎng)基接種數(shù)管,分別放在普通環(huán)境和厭氧環(huán)境中培養(yǎng)。一般經(jīng)過24—78小時(shí)觀察結(jié)果,但也有一些病原菌,需要培養(yǎng)校長時(shí)間才能生長。
被檢材料一般不需要處理,直接按種于培養(yǎng)基上。當(dāng)懷疑為有芽腦的病原苗時(shí),可將被檢材料加生理鹽水磨碎,作成1:10乳劑(液體材料不必稀釋),置60-80℃水浴中20—30分鐘,以殺死無芽胞的雜菌,然后再接種于培養(yǎng)基中。
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