臺(tái)式低速冷凍離心機(jī),轉(zhuǎn)速一般不超過4000r/min,最大容量為2~4L,是實(shí)驗(yàn)室于大量初級分離提取生物大分子、沉淀物等。其轉(zhuǎn)頭多用鋁合金制的甩平式和角式兩種,離心管有硬質(zhì)玻璃、聚乙烯硬塑料和不銹鋼管多種型號。離心機(jī)裝配有驅(qū)動(dòng)電機(jī)、定時(shí)器、調(diào)整器(速度指示)和制冷系統(tǒng)(溫度可調(diào)范圍為-20~+40℃),可根據(jù)離心物質(zhì)所需,更換不同容量和不同型號轉(zhuǎn)速的轉(zhuǎn)頭。
臺(tái)式低速冷凍離心機(jī)提取細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核蛋白離心詳細(xì)步驟:
1.決定細(xì)胞生長狀態(tài),細(xì)胞生長狀態(tài)應(yīng)該是80%或者更好:
2.用離心機(jī)以1500r/min離心5min
3.棄上清液,用等體積的冷PBS洗細(xì)胞,像步驟2那樣,反復(fù)3次
4.根據(jù)估計(jì)的沉淀量加入5倍體積的isotoniclysisbuffer到細(xì)胞顆粒中,使細(xì)胞溫和懸浮,盡量避免泡沫
5.加入裂解液lysisbuffer在懸浮的細(xì)胞中,并放在冰上15min讓細(xì)胞膨脹,可以通過顯微鏡檢查
6.對于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中膨脹的細(xì)胞,加入10%的IGEPALCA-630使最后的濃度達(dá)到0.3%,混勻,加的時(shí)候要溫和
7.立即離心(量大的可以用1.5ml的EP管,以5500r/min離心30s;量大的可以用50ml的管子以5500r/min離心2min)
8.轉(zhuǎn)移上清液(細(xì)胞質(zhì)蛋白)到一個(gè)新的冷凍管中
9.用懸浮顆粒5倍體積的isotoniclysisbuffer懸浮細(xì)胞,并混勻
10.用離心機(jī)離心細(xì)胞懸浮液,以1500r/min離心5min,移掉上清液
11.用2/3倍體積的extractionbuffer懸浮顆粒
12.把管子放置在震蕩混勻器上,以700r/min,15min震蕩混勻,接著以1400r/min,15min,整個(gè)過程要仔細(xì),避免泡沫產(chǎn)生
13.以9400r/min離心15min,低溫離心完后轉(zhuǎn)移上清液到一個(gè)新的冷凍離心管中
14.分成幾份用液氮冷凍,并且保存起來(長期保存應(yīng)放在-80℃上,短期保存要放在-20℃上)